人細(xì)胞角蛋白17(CK17)ELISA試劑盒事宜說明書

    檢測范圍：96T3μg/L-120μg/L

    使用目的：人細(xì)胞角蛋白17(CK17)ELISA試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中內(nèi)皮素（ET）含量。

    實(shí)驗(yàn)原理

    本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠內(nèi)皮素（ET）水平。用純化的大鼠內(nèi)皮素（ET）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入內(nèi)皮素（ET），再與HRP標(biāo)記的內(nèi)皮素（ET）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的內(nèi)皮素（ET）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠內(nèi)皮素（ET）濃度。

    人細(xì)胞角蛋白17(CK17)ELISA試劑盒標(biāo)本要求

    1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

    2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

    操作步驟

    1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

    120μg/L5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

    60μg/L4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

    30μg/L3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

    15μg/L2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

    7.5μg/L1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

    2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

    3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

    4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

    5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

    6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

    7.溫育：操作同3。

    8.洗滌：操作同5。

    9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

    10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

    11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

    人細(xì)胞角蛋白17(CK17)ELISA試劑盒注意事項(xiàng)

    1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

    2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

    3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

    4．請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計(jì)算時(shí)請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

    5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

    6．底物請避光保存。

    7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

    8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

    9．本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

    10.如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。

    保存條件及有效期

    1．試劑盒保存：；2-8℃。

    2．有效期：6個(gè)月