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上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司

Plasmid Mini Kit II(200)
點(diǎn)擊次數(shù):1132 更新時間:2017-10-18

質(zhì)粒小量提取試劑盒II型,Plasmid Mini Kit II(200)詳細(xì)介紹

上海遠(yuǎn)慕專業(yè)供應(yīng)ELISA試劑盒,動物血清血漿,標(biāo)準(zhǔn)品對照品,質(zhì)粒載體,質(zhì)粒提取試劑盒,培養(yǎng)基,抗體,化學(xué)試劑,生化試劑,實驗耗材,染色液,其他實驗試劑等,代理多款進(jìn)口(國產(chǎn))品牌,價格實惠,質(zhì)量有保證,洽談!

 

 

名稱:質(zhì)粒小量提取試劑盒II型

英文名/型號:Plasmid Mini Kit II(200)

品牌:Omega

供應(yīng)商:上海遠(yuǎn)慕

用途:從小于15ml培養(yǎng)過夜的菌液提取50-70ug高純度質(zhì)粒DNA

質(zhì)粒小量提取試劑盒II型,Plasmid Mini Kit II(200)詳細(xì)介紹

為了滿足生物領(lǐng)域日益增加的要求,Omega新開發(fā)的基于磁珠的純化方式,以其高結(jié)合力和高純度的核酸產(chǎn)物等*性,已經(jīng)在歐美市場得到廣泛的接收。Omega的磁珠純化方式,與目前大部分公司采用的硅磁顆粒不同,它采用的是納米磁珠同正離子相藕連而成的微型顆粒,該顆粒的結(jié)合能力是傳統(tǒng)硅磁的10-30倍,因而能大大提高核酸產(chǎn)量和純度,目前該產(chǎn)品處于世界zui的水平。此外,為滿足不同客戶的需求,Omega還開發(fā)了一些成本較低的核酸純化試劑盒,如鹽析法純化血液或組織基因組DNA純化試劑盒,玻璃奶純化試劑盒以及溶液型的RNA抽提試劑盒。

 

 

質(zhì)粒小量提取試劑盒II型,Plasmid Mini Kit II(200)操作步驟:

1.樣本處理收集已培養(yǎng)1216小時的菌液13ml12000rpm離心1分鐘盡量吸除上清。          注:菌液較多時可以通過多次重復(fù)離心將菌體收集到1個離心管中。菌液收集量由菌濃而定收集菌體過多會反而降低裂解效果。 


2.懸浮向菌體沉淀的離心管中加入250ul溶液Ⅰ用移液器反復(fù)吹打或渦旋振蕩器*懸浮細(xì)菌細(xì)胞沉淀。 


3.裂解加入250ul溶液Ⅱ于細(xì)菌懸液中溫和地上下顛倒6~8次,使菌體充分裂解,加1管混合1管,確保溶液充分、及時的混勻。充分裂解后的菌液會變得相對粘稠為防止DNA斷裂避免劇烈混勻操作及裂解時間過長。 


4.中和加入350ul溶液Ⅲ, 立即溫和上下顛倒6~8次充分混勻,加1管混合1管。此時會出現(xiàn)白色絮狀沉淀靜置2分鐘12000rpm離心5分鐘可適當(dāng)延長至10min。
注:溶液Ⅲ加入后應(yīng)立即混勻避免產(chǎn)生局部沉淀。若上清液中仍存在微小白色沉淀,可重復(fù)離心后取上清。 


5.吸附小心地將上清液轉(zhuǎn)移至吸附柱中12000rpm離心30~60秒,棄收集管中廢液,然后將吸附柱重新套入廢液收集管中。若上清一次加不完,可重復(fù)操作轉(zhuǎn)移時不可吸入沉淀,此步很重要。


6.漂洗向吸附柱中加入600ul漂洗液PW,使用前請檢查是否已加入無水乙醇,12000rpm離心30~60秒。 


7.重復(fù)步驟6,棄收集管中廢液。 


8.將吸附柱套于收集管中10000rpm離心2分鐘。 
注:此步驟不可省略,目的是去除吸附柱中殘余的漂洗液,因為漂洗液中乙醇的殘留會影響后續(xù)實驗,酶切,PCR等。 


9.洗脫將吸附柱置于一干凈的1.5ml離心管中向吸附柱膜中央部位懸空滴加50~100ul溶解液TE或滅菌雙蒸水,pH值在7.0-8.5,室溫靜置2~10分鐘,12000rpm離心2分鐘,即得提取質(zhì)粒DNA置-20℃保存。 

 

 

Plasmid Mini Kit II(200)注意事項:


1.使用前請先檢查溶液Ⅱ和溶液Ⅲ是否出現(xiàn)混濁,如有混濁現(xiàn)象,可在 37℃水浴中加熱幾分鐘,待溶液恢復(fù)澄清后再使用。溶液Ⅱ 、溶液Ⅲ和漂洗液使用后應(yīng)立即擰緊蓋子。


2.洗脫緩沖液體積不應(yīng)少于 50ul,體積過小影響回收效率;洗脫液的 pH 值對洗脫效率也有影晌,若需要用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調(diào)至此范圍), pH值低于7. 0會降低洗脫效率, DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃,以防 DNA 降解。


3.如果所提質(zhì)粒為低拷貝質(zhì)?;虼笥?10kb 的大質(zhì)粒,應(yīng)加大菌體使用量,使用 5-10ml 過夜培養(yǎng)物,同時按照比例增加溶液Ⅰ 、溶液Ⅱ和溶液Ⅲ的用量,吸附和洗脫時可以適當(dāng)?shù)难娱L時間,以增加提取效率。


4.DNA濃度及純度檢測: 得到的質(zhì)粒DNA純度與樣品保存時間、 操作過程中的剪切力等因素有關(guān)。 得到的DNA可用瓊脂糖疑膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。 DNA應(yīng)在OD 260 處有顯著吸收峰,OD 260 值為 1 相當(dāng)于大約 50ug/ml雙鏈DNA、 40ug/ml單鏈DNA。OD 260 /OD 280 比值應(yīng)為 1.7-1.9,如果洗脫時不使用洗脫緩沖液,而使用去離子水,比值會偏低,因為pH值和離子存在會影響吸光值,但并不表示純度低。

 

標(biāo)簽:Plasmid Mini Kit II(200)   質(zhì)粒小量提取試劑盒II型    質(zhì)粒小量提取試劑盒

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