染色是生物顯微玻片標(biāo)本制作中最重要的環(huán)節(jié)之一。先把破壞細(xì)胞膜的選擇透過性,再使用染色劑,將生物組織浸入染色劑內(nèi),使組織細(xì)胞的某一部分染上與其他部分不同的顏色或深度不同的顏色,產(chǎn)生不同的折射率,以便觀察。
另外,銀染法也較常用。當(dāng)組織塊浸入硝xiao酸銀溶液中時,有的組織結(jié)構(gòu)能直接把硝xiao酸銀還原,使銀粒附于其上,呈棕黑色或棕黃色。有些結(jié)構(gòu)本身對硝xiao酸銀無直接還原能力,若加入還原劑,可使硝xiao酸銀還原沉淀顯色。
在實驗中,為了能夠清楚地觀察到目標(biāo)組織或細(xì)胞,通常會采用染色的方式進(jìn)行直觀驗證。面對形態(tài)各異的組織和細(xì)胞,研究學(xué)者們想到了多種多樣的染色方法以佐證自己的實驗結(jié)果。
1、簡單染色法—常用堿性染料如美藍(lán)等進(jìn)行簡單染色;
2、革蘭氏染色法,主要包括結(jié)晶紫初染、碘液媒染、乙醇(或丙酮)脫色以及番紅復(fù)染四個過程;
3、巴氏染色法:本法染色特點是細(xì)胞具有多色性顏色,色彩鮮艷多彩。涂片染色的透明性好,胞質(zhì)顆粒分明,胞核結(jié)構(gòu)清晰,如鱗狀上皮過度角化細(xì)胞胞質(zhì)呈橘黃色;角化細(xì)胞顯粉紅色;而角化前細(xì)胞顯淺綠色或淺藍(lán)色,適用于上皮細(xì)胞染色或觀察陰道涂片中激素水平對上皮細(xì)胞的影響。此方法的缺點是染色程序比較復(fù)雜。
4、瑞特—吉姆薩染色法(wrightgiemsa atain);多用于血液,骨髓細(xì)胞學(xué)檢查。胞質(zhì)內(nèi)顆粒與核安危質(zhì)結(jié)構(gòu)顯示較清晰。操作簡便。
5、蘇木精—伊紅染色法(hemotoxylin eosin,HE):又稱蘇木素-伊紅染色法,其中蘇木素是Hematoxylin,簡稱H,伊紅是Eosin,簡稱E,這是是普通光學(xué)顯微鏡觀察與鑒別細(xì)胞凋亡與細(xì)胞壞死的一種染色方法。
這種方法適用范圍廣泛,對組織細(xì)胞的各種成分都可著色,便于全面觀察組織構(gòu)造,而且適用于各種固定液固定的材料,染色后不易褪色可長期保存。經(jīng)過HE染色,細(xì)胞核被蘇木素染成藍(lán)紫色,細(xì)胞質(zhì)被伊紅染色呈粉紅色。
該方法染色透明度好,核與胞質(zhì)對比鮮明。染色步驟簡便,效果穩(wěn)定。適用于痰液涂片,觖質(zhì)核呈紫藍(lán)色,胞質(zhì)淡玫瑰紅色,紅細(xì)胞呈淡朱紅色。