遠(yuǎn)慕生物簡述:ELISA的配置與設(shè)備?
技術(shù)原理及自備設(shè)備:
ELISA技術(shù)原理是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。在測定時,受檢標(biāo)本與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。
自備設(shè)備有,蒸餾水,加樣器,振蕩器及磁力攪拌器,酶標(biāo)儀,量筒,燒杯,吸水紙,坐標(biāo)紙,溫育箱,洗瓶,一次性試劑管,微移液及其吸嘴等。
試劑盒組成及試劑配制:
1.酶聯(lián)板:一塊(96孔)。
2.標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品):2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好后靜置10分鐘以上,然后反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為1,600pg/ml,將其稀釋為400pg/ml后,再做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別稀釋成400pg/ml,200pg/ml,100pg/ml,50pg/ml,25pg/ml,12.5pg/ml,6.25pg/ml,樣品稀釋液直接作為標(biāo)準(zhǔn)濃度0pg/ml,臨用前15分鐘內(nèi)配制。如配制200pg/ml標(biāo)準(zhǔn)品:取0.5ml(不要少于0.5ml)400pg/ml的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3.樣品稀釋液:1×20ml。
4.檢測稀釋液A:1×10ml。
5.檢測稀釋液B:1×10ml。
6.檢測溶液A:1×120μl(1:100)臨用前以檢測稀釋液A1:100稀釋,稀釋前根據(jù)預(yù)先計算好的每次實驗所需的總量配制(100μl/孔),實際配制時應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl檢測溶液A加990μl檢測稀釋液A的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內(nèi)配制。
7.檢測溶液B:1×120μl/瓶(1:100)臨用前以檢測稀釋液B1:100稀釋。稀釋方法同檢測溶液A。
8.底物溶液:1×10ml/瓶。
9.濃洗滌液:1×30ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10.終止液:1×10ml/瓶(2NH2SO4)。
11.覆膜:5張。
12.使用說明書:1份。
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