ELISA試劑盒特殊的包被方式
其后 通過抗原抗體反應(yīng)使抗原固相化。此間接結(jié)合在固相上的抗原遠(yuǎn)離載體表面,其抗原決定簇也得以充分暴露。間接包被的抗原經(jīng)固相抗體的親和層析作用,人elisa試劑盒包被在固相上的抗原純度大大提高,因此含雜質(zhì)較多的抗原也可采用捕獲包被法,試驗的特異性、敏感性均由此得以改善,重復(fù)性亦佳。間接包被 的另一優(yōu)點是抗原用量少,僅為直接包被的1/10乃至于/100。不易吸附在聚苯乙烯載體上的非蛋白質(zhì)抗原可采用。例如,在檢測抗DNA抗體時,需用 DNA作為包被抗原,而普遍的固相載體一般不能直接與核酸結(jié)合。
方法二 用于檢測未知抗體的間接法: 用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml, 每孔加0.1ml,4℃過夜。次日洗滌3次。
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人ELISA試劑盒加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被的反應(yīng)孔
中,置37℃孵育1小時,洗滌。(同時做空白、陰性及陽性孔對照)
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于反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml,
37℃孵育30-60分鐘,洗滌,zui后一遍用DDW洗滌。
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其余步驟同“雙抗體夾心法"的4、5、6。
將 抗原或抗體固定在過程稱為包被。換言之,包被即是抗原或抗體結(jié)合到固相載體表面的過程。蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結(jié)合的,靠的是蛋白質(zhì)分子 結(jié)構(gòu)上的疏水基團與固相載體表面的疏水基團間的作用。這種物理吸附是非特異性的,受蛋白質(zhì)的分子量、等電點、人ELISA試劑盒濃度等的影響。載體對不同 蛋白質(zhì)的吸附能力是不相同的,大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團,因此更易吸附到固相載體表面。IgG對聚苯乙烯等固相具有較強的吸附 力,其聯(lián)結(jié)多發(fā)生在Fc段上,抗體結(jié)合點暴露于外,因此抗體的包被一般均采用直接吸附法。