分離培養(yǎng)

　　成纖維細(xì)胞的分離培養(yǎng)一開始并不涉及成骨作用，而主要是用于研究細(xì)胞的老化、各種外來(lái)因子對(duì)細(xì)胞的損傷、細(xì)胞在體外條件下的惡性轉(zhuǎn)化、以及某些先天性代謝異常、酶缺陷等。由于皮膚成纖維細(xì)胞易于獲取，又易于在體外生長(zhǎng)，皮膚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)已在基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)研究中得到較廣泛的運(yùn)用，其分離培養(yǎng)技術(shù)已相對(duì)成熟，對(duì)其體外生長(zhǎng)規(guī)律也有了較全面的認(rèn)識(shí)。

　　原代培養(yǎng)

　　成纖維細(xì)胞的原代培養(yǎng)可用酶消化法或組織塊法，其中組織塊法又因其操作簡(jiǎn)便、條件易于控制而應(yīng)用更為普遍。通常，以酶消化法獲得的成纖維細(xì)胞懸液在接種后5～10min即可見細(xì)胞以偽足初期附著，與 底物形成一些接觸點(diǎn)；然后細(xì)胞逐漸呈放射狀伸展，胞體的中心部分亦隨之變扁平；最快者大約在接種后30min，細(xì)胞貼附底物即較為wan全，呈現(xiàn)成纖維細(xì)胞的形態(tài)。采用組織塊法則大約在接種后2～3天到1周左右，在接種的皮膚組織塊周圍長(zhǎng)出細(xì)胞。待細(xì)胞融合成片，鋪滿培養(yǎng)容器底壁大部分時(shí)即可進(jìn)行傳代。一般都采用 yi蛋白酶(trypsin)，將成纖維細(xì)胞從底壁消化下來(lái)后分瓶作傳代培養(yǎng)。成纖維細(xì)胞在體外培養(yǎng)條件下能保持良好的分裂增殖能力。細(xì)胞分裂時(shí)變?yōu)榍蛐危环至押笥制戒佋诟街锏谋砻娉蔀橛型黄鸬谋馄郊?xì)胞。體外培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞，其生命期限與物種等因素有關(guān)。

　　例如：人胚成纖維細(xì)胞約可培養(yǎng)50代；恒河猴皮膚成纖維細(xì)胞能傳代超過40代；雞胚成纖維細(xì)胞則只有少數(shù)能培養(yǎng)30代；而小鼠成纖維細(xì)胞多數(shù)只能生長(zhǎng)8代左右。另外，從老年個(gè)體取得的成纖維細(xì)胞的壽命要比取自年輕者短。由于在細(xì)胞傳代和進(jìn)行體外培養(yǎng)時(shí)，細(xì)胞的生物學(xué)特性會(huì)逐漸發(fā)生一些不同于體內(nèi)的改變，故通常只將前⑩代視這正常細(xì)胞，可在此時(shí)將生長(zhǎng)旺盛的成纖維細(xì)胞凍存起來(lái)，以備將來(lái)復(fù)蘇使用，這在將培養(yǎng)的細(xì)胞由動(dòng)物實(shí)驗(yàn)向人體實(shí)驗(yàn)過渡的過程中必須給予足夠的重視。