??凝膠層析分離物質(zhì)的優(yōu)缺點(diǎn)

??1.凝膠層析操作簡(jiǎn)便，所需設(shè)備簡(jiǎn)單。有時(shí)只要有一根層析柱便可進(jìn)行工作。分離介質(zhì)—凝膠wan全不需要像離子交換劑那樣復(fù)雜的再生過(guò)程便可重復(fù)使用。

??2.分離效果較好，重復(fù)性高。最tu出的是樣品回收率高，接近100%。

??3.分離條件緩和。凝膠骨架親水，分離過(guò)程又不涉及化學(xué)鍵的變化，所以對(duì)分離物的活性沒(méi)有不良影響。

??4.應(yīng)用廣泛。適用于各種生化物質(zhì)，如肽類(lèi)、激素、蛋白質(zhì)、多糖、核酸的分離純化、脫鹽、濃縮以及分析測(cè)定等。分離的分子量范圍也很寬，如SephadexG類(lèi)為102～105d；Sepharose類(lèi)為105～108d。

??5.分辨率不高，分離操作較慢。由于凝膠層析是以物質(zhì)分子量的不同作為分離依據(jù)的，分子量的差異僅表現(xiàn)在流速的差異上，所以分離時(shí)流速必須嚴(yán)格把握。因而分離操作一般較慢。而且對(duì)于分子量相差不多的物質(zhì)難以達(dá)到很好的分離。此外，凝膠層析要求樣品粘度不宜太高。凝膠顆粒有時(shí)還有非特異吸附現(xiàn)象。

??凝膠層析的應(yīng)用

??⑴脫鹽：高分子（如蛋白質(zhì)、核酸、多糖等）溶液中的低分子量雜質(zhì)，可以用凝膠層析法除去，這一操作稱(chēng)為脫鹽。本法脫鹽操作簡(jiǎn)便、快速、蛋白質(zhì)和酶類(lèi)等在脫鹽過(guò)程中不易變性。適用的凝膠為SephadexG-10、15、25或Bio-Gel-p-2、4、6.柱長(zhǎng)與直徑之比為5-15，樣品體積可達(dá)柱床體積的25％-30％，為了防止蛋白質(zhì)脫鹽后溶解度降低會(huì)形成沉淀吸附于柱上，一般用醋酸銨等揮發(fā)性鹽類(lèi)緩沖液使層析柱平衡，然后加入樣品，再用同樣緩沖液洗脫，收集的洗脫液用冷凍干燥法除去揮發(fā)性鹽類(lèi)。

??⑵用于分離提純：凝膠層析法已廣泛用于酶、蛋白質(zhì)、氨基酸、多糖、激素、生物堿等物質(zhì)的分離提純。凝膠對(duì)熱原有較強(qiáng)的吸附力，可用來(lái)去除無(wú)離子水中的致熱原制備注射用水。

??⑶測(cè)定高分子物質(zhì)的分子量：用一系列已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)品放入同一凝膠柱內(nèi)，在同一條件下層析，記錄每一分鐘成分的洗脫體積，并以洗脫體積對(duì)分子量的對(duì)數(shù)作圖，在一定分子量范圍內(nèi)可得一直線(xiàn)，即分子量的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。測(cè)定未知物質(zhì)的分子量時(shí)，可將此樣品加在測(cè)定了標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的凝膠柱內(nèi)洗脫后，根據(jù)物質(zhì)的洗脫體積，在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上查出它的的分子量。

??⑷高分子溶液的濃縮：通常將SephadexG-25或50干膠投入到稀的高分子溶液中，這時(shí)水分和低分子量的物質(zhì)就會(huì)進(jìn)入凝膠粒子內(nèi)部的孔隙中，而高分子物質(zhì)則排阻在凝膠顆粒之外，再經(jīng)離心或過(guò)濾，將溶脹的凝膠分離出去，就得到了濃縮的高分子溶液。